二、多次曝光显微摄影法
(一)背景
1978年,Malker描述了另外一种应用相差显微镜并结合频闪观测器的照明装置评价人类精子活动力的显微摄影法。这种多次曝光显微摄影法可显示在 1/6间隔内精子序贯位置的摄影记录,图像中"六环链"被用以区分活动精子与非活动精子并可用以计算各个活动精子的运动速度。由于该方法是使用 Malker池进行测定的,故精子的浓度也可测定。
从上述系统的有效性看,对于确定人类精液精子速度而言,1s的测量期限被认为是适当的。
多次曝光显微摄影法系统已为许多研究所采用,该系统现已发展成为一种半自动化方法,其中某些系统已有市售。快速显微摄影技术则使这一系统更趋完善。
(二)运动特征
在精液分析方面,多次曝光显微摄影法能提供精子浓度值(但如前所述受到 Malker池的限制)与活动精子的百分比。而就精子运动特征而言,通过测量六环链中精子头部的首尾位置之间的直线距离只能得到 VSL 值。利用六环链中两相邻精子头部的直线距离,则仅能得到 VAP 的近似值。遗憾的是多次曝光显微摄影法对于测量 VCL、ALH 和 BCF,既不能提供充分积分的轨迹,也不能提供快速抽样的轨迹。
鉴于 ALH 指标的明显的生理和临床意义,定时曝光显微摄影显然是一种更好的方法。
三、显微电影摄像术
(一)背景
该法用于研究精子活动力几乎已有 40 年历史。有关的经典文献报道 van Duijn 和 PhiUips分别应用低速(16张 /s)和高速(500张 /s)显微电影摄像术开始进行人类精子动力学的定性分析,而 David等人报道应用中等速度(50张 /s)显微电影摄影术研究人类精子运动特征,这些工作基本上构成了以后所有关于人类精子运动特征的研究工作的基础。
(二)运动特征
在根据电影胶片(或录像带)再现精子运动轨迹时,究竟应该用精子头-中段结合部还是精子头质心依然存在着争论。但是大多数的研究工作均应用了精子头质心。看来这显然是最为适合的方法,特别是当应用计数图像分析技术根据电影胶片和录像带来重显精子运动轨迹时。尽管由显微电影摄像术产生的空间影像和时间消退均较与现有的显微录像技术产生的要好,由于其高额的操作费用,显微电影摄像技术已或多或少为显微摄像技术所取代。
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