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内分泌性阳痿的实验室检查

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核心提示:用 400× 的相差或普通光学显微镜观察,分别记录含有抗 IgG 和 IgA 免疫珠的混合物中粘有免疫珠的活动精子百分率% 。

  【原理】

  免疫珠是以共价键结合了兔抗人免疫球蛋白抗体的聚丙烯酰胺珠。由活动精子与交联珠间的连接判断精子表面存在由精子抗体及相应的免疫球蛋白类型。当精子在免疫珠悬液中游动时,那些表面有抗体的精子粘附到免疫珠上。因此,可以测定表面包有抗体的精子比例。间接 IBT 是现时公认检测体液标本抗精子抗体最为敏感而特异的方法。

  【试剂】

  (1)正常供者精子,采自新鲜射出精液,精子上应无抗精子抗体包被,存活率为 70% 以上,活动度 a、b级精子应为 70% 以上。

  (2)免疫珠:羊抗人 IgG、IgA(BioRad公司)。

  (3)缓冲液 Tyrode溶液(g/L):

  CaCl2 0.2

  NaCl 8.0

  KCl 0.2

  NaHCO3 1.0

  NaH2PO4 0.05

  葡萄糖 1.0

  MgCl2·6H2O 0.2

  用前需用 0.22μm滤器过滤除菌。

  (4)BSA 溶液:0.4% w /v(以 Tyrode溶液配制)。

  【方法】

  (1)直接法:检测去精浆精子表面附着的免疫球蛋白。

  1)2个离心管中分别加入抗 IgG 和抗 IgA 免疫珠 0.2mL、用 0.4% BSA 缓冲液稀释至10mL。

  2)在另一支离心管中加入 0.2mL 精液,并且用 0.4% BSA 溶液稀释成 1mL。

  3)将 3支离心管离心 500 × g 5min,弃去上清,将免疫珠重悬在 10mL 0.4% BSA 溶液中。

  4)如步骤 3)再次洗涤精液后,将沉淀的精子重悬于 0.2mL 0.4% BSA 溶液。

  5)在载玻片的两端分别加 5μL IgG 和 IgA 免疫珠。

  6)再加 5μL 精液悬液到免疫珠上,用盖玻片边缘充分混匀,分别在两滴混合液上盖上一张盖玻片。

  7)湿盒静置 15min。

  8)用 400× 的相差或普通光学显微镜观察,分别记录含有抗 IgG 和 IgA 免疫珠的混合物中粘有免疫珠的活动精子百分率% 。

  (2)间接法:检查血清或精浆中抗精子抗体。

  1)将正常供者精子用 0.4% BSA 溶液如直接法中所述洗涤 2次,同时如直接法准备免疫珠悬液。

  2)将上述洗涤过的精子,用 Tyrode氏溶液调整精子浓度至 50×106/mL。

  3)将 50μL 经过洗涤的精子加到 50μL 待检血清或精浆中,于 37℃ 孵育 1h。

  4)如直接法步骤,将精子洗 2次,再如直接法 5)至 8)步骤进行测定。

  【结果判定】

  两种方法的结果判定均为:≥10% 活动精子粘有免疫珠,结果为( + )。

  注意:温度对精子活动影响很大,实验过程应保持室温在 22℃ 左右。

(实习编辑:黄秀杰)

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