半定量精子制动化试验

　　【准备】

　　（1）精子悬浮液：取正常新鲜精液，置室温液化 20min，加入 3～ 4倍量 10% 灭活兔血清生理盐水，充分混合后以 1000r/min，5min离心，去上清，沉渣以 10% 兔血清生理盐水溶液10mL 造成混悬液，如此洗涤 2次，尽量除去精浆，第 2次洗涤后的精子沉淀，用 10% 兔血清生理盐水溶液调整精子浓度为 40×106/mL，或者就在沉渣上面轻轻加入适量的 10% 兔血清生理盐水，静置室温，让活动精子上游，收集上层精子，调整浓度为 40×106/mL 备用。

　　（2）阴性对照血清：取未婚妇女血清，经 56℃ 30min 灭活处理后，预作精子制动化检测，证明无精子制动作用，以 0.5mL 量分装于小试管内，置 - 20℃ 中冻结保存，临用前取出一支溶解备用。

　　（3）补体血清：采用市售或自己制备的豚鼠血清。

　　【方法】

　　（1）A 小试管（试验管）：加入灭活待检血清 0.25 mL，精子悬浮液 0.025 mL，补体0.05mL，充分混合后，置 32℃ 孵育 60min。

　　（2）B 小试管（对照管）：加入对照血清 0.25mL，精子悬浮液 0.025mL，补体 0.05mL，混合后作同上处理。

　　（3）C 小管（患者血清对照管）：目的是观察患者血清有无使精子出现非特异性制动作用。因此在 C 管中加入患者血清 0.25mL，精子悬浮液 0.025mL，但不加补体，混合后作同上处理。

　　（4）精子不动化值计算：孵育之后，分别从 A、B、C 管各取 1滴混悬液放在载玻片上，用显微镜（200～ 400× ）观察活动精子数，具体可观察 4个视野，每个视野数 50个精子，总数中求出运动精子的百分率，即精子的运动率（% ）。

　　【判断】

　　A 管的精子运动率为 T% ；B 管的精子运动率为 C% ；精子不动化值（sperm immobiliza-tion value，SIV）为 SIV =B 管 C%/A 管 T%=C/T≥2为阳性。

　　C 管只作为试验是否成立的判断，若 C 管出现制动作用，说明检体血清有非特异性制动作用，故试验不成立。

（实习编辑：黄秀杰）

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