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固相酶染色法测抗精子抗体

2009-11-08 08:59:0039健康网社区
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  精子抗原与第一抗体(待检血清)反应后,再与辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG(Fab)2[HRP-羊抗人 IgG(Fab)2]片段结合,在酶催化底物的作用下,进行显色反应,得到具有一定电子密度的有色产物,从而可间接判断待检血清中是否存在相应的抗体。

  【试剂】

  (1)0.01mol/L pH 7.4 磷酸缓冲液(PBS)。

  (2)HRP-羊抗人 IgG(Fab)2。

  (3)底物溶液:3,3'-二氨基联苯胺盐酸盐(DAB)5mg,先用 0.1mL 二甲亚砜(分析纯)助溶,再加 PBS 5mL,3% H2O20.05mL,临用前配制。

  (4)甲醇(分析纯)。

  【方法】

  (1)取丈夫新鲜精液,液化后离心去上清。

  (2)沉淀用 PBS离心洗 3次,最后配成 5×104/mL 精子悬液。

  (3)精子悬液涂片,一式两份,室温自然干燥。

  (4)甲醇固定 10min。

  (5)分别加夫妇血清、已知阳性血清和阴性对照血清(处女 AB 型血清),37℃ 湿盒30min。

  (6)PBS洗 3次,晾干。

  (7)加 1∶1000稀释的 HRP-羊抗人 IgG(Fab)237℃ 湿盒 30min。

  (8)PBS洗 3次。

  (9)加底物溶液,37℃ 湿盒反应 15min。

  (10)PBS洗 3次,吹干镜检。

  【结果判断】

  油镜下观察,精子呈棕黄色为阳性,精子不着色或极淡黄色为阴性。

(实习编辑:黄秀杰)

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