微量精子制动试验

　　当检测的样品不是血清，而是宫颈黏液和子宫、卵管分泌液时，由于样品取材量少，难得，采用微量测定法可以弥补以上的不足。而且所得结果与半定量精子制动试验无异，所以作者的实验室即是测定血清中的抗体，亦采用微量精子制动方法。

　　【准备】

　　（1）准备微型反应板一块。

　　（2）将液状石蜡置 32℃ 预温。

　　（3）精子悬浮液及补体的制备与半定量精子制动试验相同。

　　（4）子宫、卵管内分泌液经高速离心，除去有形成分，再进行 56℃ 30min灭活处理。

　　（5）宫颈黏液提取液的制备：于排卵前，从子宫颈管取透明的宫颈黏液，放入尖底塑料小离心管内，称取黏液重量，按宫颈黏液 1mg加入灭活未婚女性血清 1μL的比例加入血清，充分搅拌后，放置 4℃ 30min，用 9700× g，30min离心分离，吸取上清作为宫颈黏液提取液，把宫颈黏液的可溶性成分估计在内，提取液的浓度作为原血清的 2 倍稀释。再经 56℃30min灭活处理后供实验用。

　　【方法】

　　（1）取微型反应板，用预温的液状石蜡充满。

　　（2）用微量移液器，分别把提取液 10μL，精子悬浮液（40× 106/mL）1μL，补体血清 2μL注入由液状石蜡封面的微型反应板孔内。

　　（3）对照设两组：① 补体对照：不加补体或以灭活补体血清代替；② 检体对照：用灭活处女血清代替；③ 用振荡法混合后，置 32℃ 孵育 1h、2h、3h；④ 取出后，用倒置显微镜（200× ）计算实验组和对照组的精子运动率（T% ，C% ）。

　　【判断】

　　当 C% 与 T% 之比在 50% 以下时，即精子制动值 SIV = C/T≥2时，判为阳性。

（实习编辑：黄秀杰）

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